您好!歡迎訪問銘修(上海)生物科技有限公司網站!
全國服務咨詢熱線:

18930233920

當前位置:首頁 > 技術文章 > 冰凍切片組織蛋白酶B(CATHEPSIN B)活性原位熒光染色

冰凍切片組織蛋白酶B(CATHEPSIN B)活性原位熒光染色

更新時間:2023-02-22  |  點擊率:506

 冰凍切片組織蛋白酶BCATHEPSIN B)活性原位熒光染色檢測試劑盒

產品說明書(中文版)

 

主要用途

 

  冰凍切片組織蛋白酶BCATHEPSIN B)活性原位熒光染色檢測試劑是一種旨在通過熒光染料甲酚紫標記的多肽底物作為探針,自由進入細胞內,受到組織蛋白酶B水解后,呈現熒光現象,以分析樣品酶活性的而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種冰凍組織內組織蛋白酶B的特異活性檢測。產品嚴格無菌,即到即用,活體檢測,操作簡易,性能穩定。

 

技術背景

 

組織蛋白酶(CATHEPSIN),是一木瓜酶papain半胱氨天冬氨酸蛋白酶Cysteine or Aspartic protease),普遍存在于溶酶體細胞器內,在酸性環境下激活,切離各種目標蛋白。根據其結構和底物特異性,組織蛋白酶家屬約有十多種成員,包括A、B、C、D、E、G、H、K、L、S等。組織蛋白酶在細胞內蛋白和細胞外蛋白通過內吞進行周轉中起著重要作用,同時也是啟動和傳遞細胞凋亡信號的替代機制,以及腫瘤和炎癥性組織損傷的病理生理變化。其中組織蛋白酶BEC 3.4.22.1),又稱為CTSB,作為溶酶體的標志性酶蛋白,可以使β-淀粉樣前體蛋白(β-amyloid precursor protein)轉化為β-淀粉樣蛋白斑點(β-amyloid plaque在抗原處理(antigen processing)、腫瘤轉移、骨再吸收、細胞內或分泌性調節蛋白周轉、卵細胞成熟、細胞凋亡等方面具有重要作用。細胞間接觸和細胞外基質成分影響43kd組織蛋白酶原L轉化為成熟蛋白。組織蛋白酶B使膠原蛋白、結締組織蛋白、β-淀粉樣前體蛋白等降解。半胱氨酸蛋白酶抑制劑ABCystatin AB)、S100A10等蛋白相互反應。組織蛋白酶B異常,導致阿茨罕默綜合癥(Alzheimer's disease、食道腫瘤esophageal adenocarcinoma等疾患。使用熒光標記的特異性底物可以探測組織蛋白B的特異活性。熒光染料甲酚紫(cresyl violet)上基團,通過酰胺(amide linkage)與人工合成的肽化合物組織蛋白酶B底物RRArg-Arg;精氨酰)雙重替換后,受到組織蛋白酶B的水解后,釋放出具有紅色熒光的單一基團替換或無替換的甲酚紫,以此進行熒光(激發波長510560nm,散發波長570620nm波長)檢測組織蛋白酶B的活性。

 

產品內容

 

  染色液(Reagent A            微升

  稀釋液(Reagent B            毫升

  清理液(Reagent C            毫升

產品說明書               1

 

保存方式

 

保存  染色液(Reagent A在-20℃冰箱里,其余的保存在4℃冰箱里;  染色液(Reagent A)避免光照;有效保證6

 

 

 

用戶自備

 

1.5毫升離心管:用于染色工作液配制的容器

(共聚焦)熒光顯微鏡:用于組織細胞熒光定性分析

 

實驗步驟

 

實驗開始前,將-20℃冰箱里的試劑盒中的  染色液(Reagent A置入冰槽里融化,  稀釋液(Reagent B室溫下預熱。然后移出xx微升  染色液(Reagent A到新的1.5毫升離心管,加入xx微升  稀釋液(Reagent B,混勻后,室溫下靜置,并標記為  染色工作液,放在暗室里。然后進行下列操作。

 

1. 準備2片待測的厚為10微米的未經固著處理的冰凍切片(注意:建議使用異戊烷快速冷凍制片)

2. 置于室溫下,小心加上xx微升預冷的  清理液(Reagent C,鋪滿整個切片表面

3. 小心移去切片上的  清理液(Reagent C

4. 小心加上xx微升室溫預熱的含有  染色液(Reagent A  稀釋液(Reagent B  染色工作液,鋪滿整個切片表面

5. 37℃濕潤培養箱里,孵育3060分鐘(注意:避免液體蒸發;可以蓋上蓋玻片孵育

6. 小心移去切片上的  染色工作液,避免光照

7. 小心加上xx微升  清理液(Reagent C,鋪滿整個切片表面

8. 小心移去切片上的  清理液(Reagent C

9. 放上蓋玻片或封片

10. 即刻在共聚焦或倒置熒光顯微鏡下進行觀察 濾波器激發波長550nm,散發波長610nm ――如果色熒光強度顯著增強,表明組織蛋白酶B活性增強

 

注意事項

 

1. 本產品為20次(0.1毫升工作液)操作

2. 所有操作均須無菌狀態下進行

3. 操作時,須戴手套

4. 建議使用正常組織切片作為陰性對照,顯示微弱的背景信號

5. 建議染色完成后,即刻進行熒光檢測分析

6. 用戶可以使用510560nm激發波長和570620nm散發波長的任一波長進行檢測

7. 用戶可以使用赫斯特33342Hoechst33342)進行復染,終濃度為1微克/毫升

8. 孵育時,必須避免光照

9. 本公司提供系列組織蛋白酶熒光染色分析試劑產品

 

質量標準

 

1. 本產品經鑒定性能穩定

2. 本產品經鑒定熒光清晰

 


掃一掃,關注微信
地址:上海市楊浦區武寧路269號 傳真:86-021-55825868
©2024 銘修(上海)生物科技有限公司 版權所有 All Rights Reserved.  備案號:滬ICP備16032190號-1
久久综合亚洲精品_超碰伊人久久青草_精品久久久久久久久中文字幕_国产农村无码迅雷下载 欧美精品九九99久久在 欧美亚洲综合五月天久久 99久久这里只免费视看 国产精品九九九国产盗摄 国产精品igao激情视频 国产真实灌醉下药福利论坛 国产偷国产偷亚洲清高图片 真实国产乱子伦对白视频不卡 特级婬片国产db高清视频